飼料添加劑效率公式表-飼料添加劑使用技術(shù)
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1、擴增效率計算公式
Ct=-1/lg(1 Ex)*lgX0 lgN/lg(1 Ex)。n為擴增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù),X0為初始模板量,Ex為擴增效率,N為熒光擴增信號達到閾值強度時擴增產(chǎn)物的量。起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。
兩個都是通過標準曲線法計算擴增效率,其實是一樣的,按照定義理解,完全擴增的話1條變2條,2條變4條,擴增效率200%,但一般通過軟件計算都是提供第一種方法(用的比較多),擴增效率最大為100%。本質(zhì)上兩者是相同的。
擴增效率(Eff)可以通過以下公式進行計算:Eff = 10 (–1/slope) – 1 PCR的效率應(yīng)當在90-110%之間(6 斜率 1)。有一系列變量會影響到PCR的效率。
如果未知樣品的Ct=25,代入方程:25=-432X 3638,所以:X=8Copies=10^822-DDCt定量2-DDCt方法使用的前提是內(nèi)參和目的基因的擴增效率接近100%,且相差不超過5%。
復孔間CT值取平均值,得到三組CT值。除此之外同學們要注意的是標準曲線繪制及擴增效率計算:可以在excel上進行擴增效率的計算,稀釋梯度可以設(shè)置為-1/-2/-3,每個梯度對應(yīng)的CT值分別為269/204/30.27。
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